注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

谷氨酸半胱氨酸連接酶(GCLM)重組蛋白英文名稱：Recombinant Glutamate Cysteine Ligase, Modifier Subunit (GCLM)

小鼠結(jié)腸細胞英文名稱：CT-26 WT

食管英文名稱：KYSE510

暗產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces phaeochromogenesEBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細胞

人腺細胞英文名稱：MX-1

黃色孢鏈霉菌 Streptomyces longisporoflavus腫瘤細胞

腦心浸瓊脂/心浸瓊脂/BHI瓊脂/BHI Agar用于培養(yǎng)各種細菌250克國產(chǎn)/進口

Hce-8693(人盲腸腺細胞(未分化))5×106cells/瓶×2

營養(yǎng)瓊脂平板/普通肉湯瓊脂平板/Nutrient Agar Plate一般細菌的培養(yǎng)和細菌總數(shù)的測定50塊國產(chǎn)/進口

ACHN, 人腎細胞腺細胞Ponceau Stain Reagent/麗春紅染色試劑

匹克氏肉湯基礎/匹克氏肉湯基礎A/Picks Broth Base/Pick，s Broth Base A溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

駱駝痘病毒PCR檢測試劑盒廠家大鼠腎實質(zhì)細胞*培養(yǎng)基小鼠肥大細胞細胞

檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum人腦微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus

A-498(人腎細胞)HL-60, 人早幼粒白血病細胞

炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius中國臺灣根霉 Rhizopus formosensis

費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii香菇 Lentinula edodes

KB/鼻咽細胞人胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養(yǎng)基

黑色淺灰鏈霉菌 Streptomyces nigrogriseolus釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

肺腺弗氏鏈霉菌 Streptomyces fradiae

熱帶假絲酵母 Candida tropicalisFaDu(人咽鱗細胞)

牛舌菌、肝色牛排菌 Fistulina hepatica釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠胰島素瘤細胞大豆慢生根瘤菌

人臍靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基人腺成纖維細胞*培養(yǎng)基

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum人骨髓間充質(zhì)干細胞（hMSCs）

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。