詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
鵝裂口線蟲PCR檢測試劑盒說明書 | Amidostomum anseriPCR | BK-P8784 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
TE-1(人食管細胞)Dami(人巨核細胞白血病細胞)
七葉苷發(fā)酵管BR20支國產/進口
費氏中華瘤菌 Sinorhizobium fredii香菇 Lentinula edodes
豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vigna粘紅酵母 Rhodotorula glutinis
Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基/Cary-Blair Transfort Medium運送腸道致病菌標本250克國產/進口
孢磺啶(MUGal肉湯凍干配套試劑) 規(guī)格: 0.5mg/支x10 用途: 每支添加于100ml(022051)中配成MUGal肉湯。
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis雙孢蘑菇
NLN培養(yǎng)基/NLN MediumBR10升國產/進口
連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Catenin Beta 1 (CTNNb1)
人呼吸道上皮細胞*培養(yǎng)基樹干畢赤酵母 Pichia stipitis
人肝細胞英文名稱:Hep G2
鵝裂口線蟲PCR檢測試劑盒說明書小鼠腎足突細胞*培養(yǎng)基100mL
半固體瓊脂 規(guī)格: 250g 用途: 供細菌動力觀察、菌種保存等用(GB 4789.4-2010和GB/T4789.8-2008)。
水解酪蛋白胨(MH)瓊脂 規(guī)格: 250g 用途: 滅菌后冷卻至45℃左右時加入5%的脫纖維羊血,配成Mueller Hinton 血平板,用于空腸彎菌的藥敏試...
白介素2受體β(IL2Rβ)重組蛋白 Recombinant Interleukin 2 Receptor Beta (IL2Rb)
胱天蛋白酶7(CASP7)重組蛋白 Recombinant Caspase 7 (CASP7)
葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)重組蛋白 Recombinant Glucose Transporter 1 (GLUT1)
血管內皮生長因子C(VEGFC)重組蛋白 Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor C (VEGFC)
Daudi(人淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2
A-427(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
R 1610(倉鼠肺細胞)5×106cells/瓶×2
人頸表皮細胞 ME-180
大鼠肝細胞 CBRH-7919
山梨醇麥康凱瓊脂平板/Sorbitol Maconkey Agar Plate10塊國產/進口
聚山梨酯80培養(yǎng)基(需氧、厭氧菌)/Tween80 Medium(Bacteria)油劑藥品的無菌試驗250克國產/進口
TBX培養(yǎng)基/TBX Agar/Tryptone Bile X-glucuronide Agar檢測大腸菌群,大腸菌群培養(yǎng)24小時,顯蘭色1升國產/進口
3% NaC1賴氨酸脫羧酶發(fā)酵管BR20支國產/進口
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