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簡要描述:禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基/Lysine Decarboxylase Medium用于細菌賴氨酸脫羧酶試驗5克國產(chǎn)/進口WI-38(人5×106cells/瓶×2釀酒酵 Saccharomyces cerevisiae
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技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Avian Pox virus(=Fowl Pox Virus、FPV)PCR | BK-P8828 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
燕麥鐮刀菌 Gibberella avenacea球型芽孢桿菌 Bacillus sphaerious
鏈輪枝菌 Streptoverticillium sp.粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe
沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 規(guī)格: 1000ml 用途: 用于沙門氏菌的快速分離和鑒定。(GB4789.40-2010)
葡萄球菌屬 Staphylococcus sp.小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 Yersinia enterocolitica
亮綠瓊脂培養(yǎng)基/Brilliant Green Agar沙門氏菌分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
亞酸胱氨酸增菌(SC) 規(guī)格: 100g 用途: 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。(GB18466-2005)
植物桿菌 Lactobacillus plantarum大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基/Lysine Decarboxylase Medium用于細菌賴氨酸脫羧酶試驗5克國產(chǎn)/進口
WI-38(人胚肺細胞)5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae植物桿菌 Lactobacillus plantarum
人膚肥大細胞*培養(yǎng)基100mL
禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書溴百里香酚蘭 Bromothymol blue 624.38分子量: C27H28Br2O5S*:76-59-5
2--4--6-甲嘧 139.16 2- amino -4- -6-*:28840-64-4分子量: C5H9N5
異補骨脂查爾酮 ISO bavachalcone 分子量:*:
萘酚AS-BI硫鉀 Naphthol AS-BI potassium sulfate 分子量:*:78689
固綠FCF Solid green FCF 808.91分子量:*:2353-45-9
無水二氫鉀 94.97 Anhydrous potassium dihydrogen phosphate*:14265-44-2分子量: O4P-3
2,7-二溴-9-(9-十七烷)咔唑 563.46 2,7- -9- (9- dibromo seventeen alkyl carbazole)*:955964-73-5分子量: C29H41Br2N
5-溴-2-硝吡 202.99 5- -2- nitro pyridine*:39856-50-3分子量: C5H3BrN2O2
活性橙16 Reactive Orange 16 分子量: C20H17N3Na2O11S3*:12225-88-6
樹脂天青 Resazurin 251.17分子量: C12H6NNaO4*:62758-13-8
7--1-甲-1,2,3,4-四氫喹啉 162.23 7- amino -1- methyl -1,2,3,4- four*:304690-94-6分子量: C10H14N2
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