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簡要描述:枝孢霉通用PCR檢測試劑盒說明書上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:米根霉人肌組織來源細(xì)胞人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeUM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞褐單梗曲霉 Ochrobactrum anthropi嗜根考克氏菌 Kocuria rhizophila球菌屬 Lactococcus sp.
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原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
枝孢霉通用PCR檢測試劑盒說明書 | Cladosporium spp.PCR | BK-P8996 |
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
異阿魏酸 CAS 537-73-5 * 規(guī)格: HPLC≥97;20mg
(R型)原人參二醇 CAS * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
2”-O-沒食子?;鸾z桃苷 CAS 53209-27-1 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
原蘇木素B CAS 102036-29-3 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
鉤藤堿 CAS 76-66-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
貝母素甲 CAS 23496-41-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
諾米林 CAS 1063-77-0 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
芝林素 CAS Sesamolin * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
原薯蕷皂苷 CAS 55056-80-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
絡(luò)塞維 CAS 84954-92-7 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
巴馬??;黃藤素 CAS 10605-02-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
富馬酸 CAS 110-17-8 * 規(guī)格: 20mg
L-谷胱甘肽 CAS 70-18-8 * 規(guī)格: 20mg
蒼術(shù)(90%)鑒別用 CAS 6989-21-5 * 規(guī)格: 20mg
棕櫚酸乙酯 CAS 628-97-7 * 規(guī)格: 20mg
枝孢霉通用PCR檢測試劑盒說明書釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
節(jié)桿菌 Arthrobacter sp.NCI-H716(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)
H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞)蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis
異常漢遜酵母 Hansenula anomala蜜黃馬杜拉放線菌 Actinomadura chelvata
米根霉人肌組織來源細(xì)胞
人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞褐單梗曲霉 Ochrobactrum anthropi
嗜根考克氏菌 Kocuria rhizophila球菌屬 Lactococcus sp.
香菇 Lentinula edodes苜蓿中華根瘤菌
Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢腺細(xì)胞系
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae無花果曲霉 Aspergillus ficuum
威德摩爾鏈霉菌 Streptomyces wedmorensis毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞田菁根瘤菌 Azorhizobium canlinodans
mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞Ana-1(小鼠巨噬細(xì)胞)
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae雅致放射毛霉 Actinomucor elegans
慶豐鏈霉菌 Streptomyces qingfengmyceticus苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
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