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糖原合成酶(GCS)測試盒紫外分光光度法

簡要描述:糖原合成酶(GCS)測試盒紫外分光光度法公司正在出售的產品:SC增菌液進口、國產Selenite Cystine Broth250克選擇性增菌培養(yǎng)SE增菌液進口、國產Selenite Enrichment Medium250克增殖標本中的亮綠瓊脂進口、國產Brilltant Green Agar250克分離培養(yǎng)亮綠增菌液進口、國產Brilltant Green Enrichment Broth25

  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2023-12-24
  • 訪  問  量:742

詳細介紹

商品介紹:

測定意義:

GCSEC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對糖代謝的調節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。

測定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

需自備的儀器和用品:

分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!

產品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

糖原合成酶(GCS)測試盒紫外分光光度法

50管/48樣

紫外分光光度法

BK-01S6981

11.png 

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

500 mL McCoy's 5A(含1%雙抗+10%小牛血清) Cell Culture Medium -20℃保存

500mL Acrylamide: Bis-acrylamide Solution(丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液),29:1   Acrylamide: Bis-acrylamide Solution,29:1   常溫保存

2500mL TAE電泳液,50× TAE Buffer, 50× 常溫

2 ug pGAS-TA-Luc pGAS-TA-Luc 低溫運輸,-20℃保存

50次 柱式質粒 DNAout Column Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)

1瓶 CNE細胞株 CNE 低溫運輸和保存

結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板(9cm) Violet Red Bile Agar 10個/包

50U 切刻 Uracile Nicking Enzyme -20℃保存

100mL PIPES Buffer,0.5M, pH6.5  PIPES Buffer,0.5M, pH6.5  常溫保存

10管 穿刺 Stab Medium 4℃保存

2 ug pPIC 6C pPIC 6C 低溫運輸,-20℃保存

糖原合成酶(GCS)測試盒紫外分光光度法WASF3  Verprolin同源結構域包含蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea pig IgG/HRP  辣根過氧化物標記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Cathepsin H/CTSH  組織蛋白H抗體 規(guī)格: 0.1ml

BAGE3  瘤/睪抗原2.3抗體 規(guī)格: 0.2ml

NKG2C  NK細胞受體2C抗體 規(guī)格: 0.2ml

BACH1/BRIP1  易基因相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

IL-17D/IL-27  白介素-17D抗體 規(guī)格: 0.1ml

ECP  嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

COMTD1/AVSD2  富含半胱與表皮生因子樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

DBC2  基因刪除蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

CDAN1  先天性紅細胞生成異常性貧蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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