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ATP含量測試盒HPLC法

簡要描述:ATP含量測試盒HPLC法公司正在出售的產(chǎn)品:皰肉牛肉粒 英文名稱:Dried Meat Particle 產(chǎn)品規(guī)格:100g 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 英文名稱:Thiolglycollate Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱:Egg Yolk Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 英文名稱:Power - nitrate medium 產(chǎn)品規(guī)格:

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2023-12-27
  • 訪  問  量:582

詳細介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:ATP含量測試盒HPLC法

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣

檢測方法:HPLC法

產(chǎn)品貨號:BK-01S6550

產(chǎn)品分類:氧化磷酸化系列
商品介紹:

測定意義:

ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。

測定原理:

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量,以此反應(yīng)ATP含量。

自備儀器和用品:

分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

 

細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實驗方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

2 ug pSEP2 pSEP2 低溫運輸,-20℃保存

100mL MAL指示劑培養(yǎng)基 MAL Indicator Medium 常溫

2 ug pCI pCI 低溫運輸,-20℃保存

溶液(20mg)  1ml*5

1g n- 辛基 -β-D- 吡喃葡萄糖苷 n-Octyl-β-D-Glucopyranoside (OGP) -20℃保存

50T 犬布氏桿菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

1 mg MM4-64(FM®4-64) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

100mL CAPSO Buffer,0.2M,pH10.0  CAPSO Buffer,0.2M,pH10.0  常溫保存

200mL 電泳級丙烯酰胺溶液(干粉型) Acrylamide Solution(19:1Po`wder),EG 常溫

2 ug pGlue pGlue 低溫運輸,-20℃保存

100g DNTris Base(三羥甲基氨基甲烷)  

ATP含量測試盒HPLC法LATS1  瘤抑制基因LATS1抗體 規(guī)格: 0.2mlHCG Beta(4H7)  人絨毛膜促性激素β亞基單抗 規(guī)格: 0.1ml

PAX9  配對盒基因9抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/AP  堿性磷酸(AP)標記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

RFPL4B/RNF211  環(huán)指蛋白211抗體 規(guī)格: 0.2mlANKRD13B  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體 規(guī)格: 0.2ml

TNMD/tenomodulin  腱調(diào)蛋白抗體(軟骨調(diào)節(jié)素樣1蛋白) 規(guī)格: 0.2mlCDKN2A/p19ARF  p19ARF抑基因抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-HDAC6 (Ser22)  磷酸化組蛋白去乙酰化6抗體 規(guī)格: 0.1mlAMPK gamma 1  苷酸活化蛋白激γ1抗體 規(guī)格: 0.2ml

SCCA/SERPINB4  絲蛋白抑制劑B4抗體(鱗狀細胞抗原) 規(guī)格: 0.2ml

TRIM10/RNF9  環(huán)指蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml

SIRT1  沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

MRP5/ABCC5  多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.1ml

KBTBD10  BTB-kelch蛋白家族10抗體 規(guī)格: 0.2ml

USP1  泛素特異性蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

GDAP2  誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml 

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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