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簡(jiǎn)要描述:尿酸(UA)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱:Baird-Parker Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 亞碲酸鹽卵黃增菌液 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:5ml*10 兔血漿 英文名稱:Rabbit plasma 產(chǎn)品規(guī)格:0.5ml*10 DNA瓊脂 英文名稱:DNase Agar 產(chǎn)品規(guī)格:100
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:尿酸(UA)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6450
產(chǎn)品分類(lèi):氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測(cè)定意義: UA是鳥(niǎo)類(lèi)和爬行類(lèi)動(dòng)物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。此外,UA還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi)UA生成量和排泄量不平衡會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如,血中UA升高會(huì)引起痛風(fēng)、腎功能損害和動(dòng)脈硬化,相反UA降低會(huì)引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。 測(cè)定原理: 尿酸酶能催化UA生成,CO2及H2O2,H2O2 氧化亞鐵中的Fe2+ 生成Fe3+ ,Fe3+進(jìn)一步與酚和4-氨基縮合生成紅色醌類(lèi)化合物,在505nm下有特征吸收峰,測(cè)定反應(yīng)體系505nm的吸收值,可計(jì)算尿酸的含量。 需自備的儀器和用品: 恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
100mL AMP Buffer,0.5M,pH10.5 AMP Buffer,0.5M,pH10.5 常溫保存
50uL 電泳級(jí)耐熱型SYBR染料 SuperSYBR,EG 常溫閉光
2 ug pGEMEX-1 pGEMEX-1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
抗生素檢定培養(yǎng)基9號(hào) Antibiotic Agar NO.9 250g
1瓶 DLD-1細(xì)胞株 DLD-1 低溫運(yùn)輸和保存
BCYE-CYS瓊脂平板(9cm) BCYE-CYS Agar 10個(gè)/包
1000U T4 RNA連接(T4 RNA Ligase) T4 RNA Ligase -20℃保存
乳酸桿菌選擇性瓊脂 Lactobacillus Selective Agar 250g
1 管 JM103大腸桿菌 JM103 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pPinPoint-Xa3 pPinPoint-Xa3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乳糖發(fā)酵管 20支
尿酸(UA)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法FOG1 GATA結(jié)合蛋白1伴侶蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
PCNA(1C11) 小鼠增細(xì)胞核抗原單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
VNN1 管非癥分子1抗體 規(guī)格: 0.2mlCCL21/6Ckine 淋巴細(xì)胞趨化因子CCL21抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-MCK10/CD167a/DDR1(Tyr513) 磷酸化神經(jīng)上皮酪激抗體(激10) 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Bovine IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
phospho-FADD(Ser194) 磷酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgM/AP 堿性磷酸(AP)標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
URG4 (C terminal) 上調(diào)基因4抗體(C端) 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Rb (Ser608) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Renin 素/管緊張素形成Ren1抗體 規(guī)格: 0.1mlITPR3 5-三磷酸肌醇受體3抗體 規(guī)格: 0.2ml
NHE1/APNH1 鈉通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTMEM74 跨膜蛋白74抗體 規(guī)格: 0.2ml
FAM82A1/RMD2 微管動(dòng)力調(diào)節(jié)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-CDKN1A/P21 (Thr57) 磷酸化p21蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
NALP4 /睪抗原58抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-C-Myc(Thr373) 磷酸化致基因C-Myc抗體 規(guī)格: 0.1ml
5HTR3B/5HT3B receptor 5-羥色胺受體3B抗體 0.1mlPhospho-TIF1 beta(Ser824) 磷酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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