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NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法

簡要描述:NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法輔酶Ⅰ系列公司正在出售的產(chǎn)品:大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)顆粒 英文名稱:Tryptose Soya Agar 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 改良馬丁培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Martin Medium, Modified 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Sabouraud’s Glucose Broth Mediu

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2023-12-29
  • 訪  問  量:660

詳細介紹

商品介紹:

測定意義

測定意義:

MDH EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,線粒體中MDHTCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDHNADP-依賴的MDH,細菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細胞中,NAD-MDH分布于細胞質(zhì)和線粒體中。

測定原理:

NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6327

11.png 

實驗結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細胞樣品的準(zhǔn)備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

大豆酪蛋白消化物吐溫80瓊脂培養(yǎng)基(SCDCPA)  250g

1g 丁酸鈉 Butyric Acid Sodium Salt 室溫干燥保存

胰胨大豆胨固綠瓊脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 250g

10mL 鈣蛋白抑制劑Ⅰ溶液,10mg/mL Calpain InhibitorⅠSolution -20℃保存

2 ug pUB6/V5 His B pUB6/V5 His B 低溫運輸,-20℃保存

100mg 消解(溶細胞)干粉 Zymolase Powder -20℃保存

2 ug pEGM-7ZF(+) pEGM-7ZF(+) 低溫運輸,-20℃保存

乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基 Lactobacillus broth Medium 250g

10mg apo- 轉(zhuǎn)鐵蛋白  

50T 豬肺炎支原體PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

25mg 無內(nèi)毒素螢火蟲熒光素 Endo-free Luciferin -70℃干燥避光保存

NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法Casein  酪蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml

PLGF/PIGF (mouse, rat, pig)  胎盤生因子抗體(小鼠、大鼠、豬) 規(guī)格: 0.1ml

CCDC93  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93抗體 規(guī)格: 0.2ml

KCNN4  鈣激活鉀通道蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml

GPA/GYPA/CD235a  型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

CPLA2 beta  胞漿型磷脂A2抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP激活蛋白GAP抗體 規(guī)格: 0.1ml

ADAMTS7  整合素樣金屬蛋白與凝1型-7抗體 0.1ml

CD168/RHAMM  透明質(zhì)酸介導(dǎo)細胞游走受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Blood Group Antigen Precursor  型抗原前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

IRS1  胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.2ml

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