注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

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水貂病毒性腸炎病毒PCR檢測試劑盒說明書內(nèi)皮脂肪酶抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：Endothelial lipase

多發(fā)性外生骨疣樣蛋白3抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：EXTL3

軟骨外胚層發(fā)育不良相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：EVC1

凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Flightless 1

補(bǔ)體因子I輕鏈抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Factor I light chain

FRMD8蛋白抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：FRMD8

叉頭蛋白E3抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：FOXE3

GATA結(jié)合蛋白2伴侶蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：FOG2

磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：Phospho-FLT3 (Tyr969)

Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：FNDC1

G蛋白偶聯(lián)受體GPR110蛋白抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：GPR110 protein

葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Glucokinase regulatory protein

骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：Gremlin

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ2抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：GSTT2

G蛋白偶聯(lián)受體105抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：GPR105

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。